Aplicación de técnicas moleculares en la identificación de Tetraselmis sp., utilizando el gen 18S ARNr.

Abstract

En el Litoral de la Península de Santa Elena se aisló y cultivó una cepa de microalga PM-013 que forma parte del Proyecto INCYT-PNF-2017M3112, identificada por taxonomía convencional como Tetraselmis. En la mayoría de microalgas el gen ARNr 18S es utilizado como marcador en la identificación molecular. En este trabajo se utilizó el gen marcador ARNr 18S para la identificación de la cepa PM-013, el mismo inició con la amplificación y obtención del mapa de restricción in silico mediante herramientas bioinformáticas primer-BLAST in silico y NEBcutter v2.0. Mientras que en la parte experimental se realizó la extracción del ADN total aplicando el Protocolo TENS, y para la amplificación en cadena de la polimerasa PCR se utilizaron cebadores específicos diseñados en el programa Geneious Prime® 2019. v1.3. El producto de PCR fue digerido con enzimas de restricción. La extracción del ADN alcanzó una concentración de 4344,8 ng/µL y una pureza de 2,05 A260/A280 Los cebadores PM 004 y TH 101 entregaron un producto de PCR de 1237 pb, el mismo que fue digerido por las enzimas BstU1, Msp1 y Rsa1 obteniéndose el mapa de restricción experimental. El tamaño de los fragmentos fue corroborado al comparar los mapas de restricción in silico y experimental. Los estudios moleculares aplicados indican que la cepa PM-013 es efectivamente Tetraselmis sp.