Análisis comparativo de tres protocolos de extracción de ADN en carne de tortuga marina varadas en playas de la Península de Santa Elena entre mayo y junio de 2023

Abstract

La identificación post-mortem de especies de tortugas marinas se lleva a cabo normalmente mediante la observación externa de los individuos que cumplen con claves morfológicas únicas. Sin embargo, la categorización de estos criterios muchas veces está sujeto a errores o vacíos por la falta del cumplimiento de requisitos mínimos de identificación. El desarrollo de innovaciones en tecnologías moleculares, métodos estadísticos y herramientas genéticas han contribuido de manera significativa en aspectos de la biología y manejo de la conservación de tortugas marinas. El presente estudio tiene como objetivo comparar tres protocolos de extracción de ADN en carne de tortuga marina mediante el análisis y cuantificación de ADN para la obtención de un método sencillo, económico, reproducible y no contaminante. Las muestras fueron obtenidas de tortugas marinas en diferentes estados de descomposición varadas en playas de la Península de Santa Elena durante mayo y junio de 2023. Los métodos analizados fueron modificaciones de: protocolo de sal común (NaCl); protocolo de gradiente de sales (GS); y protocolo de gradiente de sacarosa (GSC). También se estudiaron los preservantes ARNLT, Etanol al 40% y Etanol al 96%. Según los criterios evaluados, se concluyó que el protocolo por gradiente de sales resultó ser el más conveniente según sus valores de concentración de ADN (120 ± 73.85 ng µL-1, ANOVA, p=0.000) y con una pureza 260:280 aceptable de 1.60±0.23 (p=0.043). seguido del método de NaCl y como peor opción el de GSC. Se determinó también que sí es posible extraer ADN en muestras de tortugas marinas descompuestas y que es preferible tomar muestras de ligamentos en lugar de músculos. El preservante seleccionado como mejor opción fue ET40 con una media de concentración de 97.51 ± 57.14 ng µL-1 y pureza 260:280 de 1.58 ± 0.27. Pero sus diferencias no fueron significativas, pues p=0.314 y 0.228, respectivamente.