Efecto de la temperatura en la amplificación del Gen 18S ARNr de dos microalgas a través de la reacción en cadena de la polimerasa PCR.

Abstract

La amplificación o replicación de la molécula de ADN, consiste en que una molécula madre puede producir dos moléculas hijas idénticas en toda su secuencia.Una forma de amplificar el ADN in vitro es a través de la técnica de la PCR, en donde, la temperatura de hibridación de los partidores juega un rol importante a la hora de amplificar un gen. Existen diversos marcadores moleculares en el estudio de las microalgas; sin embargo, el gen 18S ARNr sobresale como marcador molecular en la identificación de células eucariotas. Por lo que el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la temperatura en la amplificación del gen 18S ARNr de dos microalgas a través de la Reacción en Cadena Polimerasa PCR. Para el efecto, se utilizaron muestras aisladas de la península de Santa Elena, registradas con los códigos PM016 y PM017, pertenecientes al proyecto INCYT-PNF2017M3112. La extracción de ADN se realizó mediante el protocolo NaCl modificado y el protocolo TENS modificado, para la amplificación se diseñaron partidores con herramientas bioinformáticas como Geneious Prime® y Primer-BLAST, posteriormente se evaluaron gradientes de temperatura y ciclos de PCR. El protocolo TENS arrojó mejores resultados con respecto a los valores de concentración 150-700ng/µl y pureza >1,8. La evaluación de gradientes de temperatura demostró que la temperatura óptima para la cepa PM017 es de 64ºC con los partidores PM017F y PM017R amplificando fragmentos de 1320pb; mientras que para la cepa PM016 la temperatura eficiente es a 59ºC empleando los partidores TH100F y TH101R logrando fragmentos de 1230pb. Mientras que la evaluación del efecto de la temperatura con respecto al ciclo de amplificación mostró que 25 ciclos son suficientes para generar amplicones que permitan demostrar la presencia del gen 18S ARNr.